【用途】 本試劑盒采用實時熒光PCR方法檢測豬全血、 血清、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、扁桃體、肺、肌肉等 樣品及環(huán)境樣品中非洲豬瘟病毒（ASFV）的DNA， 適用于ASFV的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【原理】 提取樣品DNA作為模板，以引物為起點合成與 DNA模板互補的新鏈，在熱啟動Taq酶的作用下， 經(jīng)高溫變性、中溫退火及延伸的循環(huán)，使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大一倍，經(jīng)熒光素標記的探針與擴 增的DNA雜交，利用Taq聚合酶的5'→3'外切活性， 使熒光探針的報告基團與淬滅基團分離，發(fā)出特異 性熒光信號，利用熒光PCR儀檢測特異性熒光信號， 根據(jù)樣品Ct值的大小及擴增曲線的形成情況判定結(jié) 果。

【試劑盒組成】 詳見說明書

【需要自備的器材】

1．試劑：核酸提取試劑。

2．儀器：離心機、熒光PCR擴增儀、-20℃冰箱、 可調(diào)移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）。

3．耗材：熒光PCR專用反應(yīng)管、吸頭（10μL、200μL、 1000μL）。

【使用注意事項】

1． 建議與世紀元亨提供的柱式DNA核酸提取試劑 盒配套使用。

2． 實驗過程中進行陰性對照和陽性對照樣品的質(zhì) 量控制，需進行提取，建議提取用量分別為 100μL。

3． 所有接觸病料的物品均應(yīng)合理處置，以免污染實 驗室。

4． PCR整個試驗分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴增區(qū)。 流程順序為配液區(qū)→模板提取區(qū)→擴增區(qū)。嚴禁 器材和試劑倒流。

5． 所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲存。-20℃保存的各 試劑管使用前應(yīng)完全融化，8000rpm 離心 15s， 使液體全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液體時 移液器吸頭盡量在液體表面層吸取，使用后立即 放回-20℃。

6． 注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。

7． 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過 程中移液、定時等全部過程必須精確。

8． 反應(yīng)體系應(yīng)在特定配液區(qū)或者超凈工作臺中配 制，整個實驗過程嚴格控制污染。 9． 反復(fù)凍融試劑將降低檢測靈敏度，本試劑盒應(yīng)在 3 次內(nèi)用完。

【樣品采集】 病死或撲殺豬，取脾臟、淋巴結(jié)、腎臟、扁桃 體、肺、肌肉等；待檢活豬，用注射器取血5 mL； 或采集與病豬相關(guān)場所的糞便、飼料、污水等環(huán)境 樣品。2～8 ℃保存，送實驗室檢測。（要求送檢病料 新鮮，嚴禁反復(fù)凍融。）

【實時熒光PCR操作】 詳見說明書

【結(jié)果判定】詳見說明書

【規(guī)格】50份/盒

【保存及有效期】于-20℃以下保存，有效期為 12 個月。